Studio EPR dell'effetto del congelamento sull'eterogeneità strutturale di metallo-proteine
Autore
Andrea Stirpe - Università degli Studi della Calabria - [1999-00]
Documenti
Abstract
La spettroscopia di Risonanza Paramagnetica Elettronica (EPR) è stata usata per indagare gli effetti indotti dalla velocità di congelamento e dalle proprietà chimico-fisiche del solvente sull'eterogeneità strutturale di due Blue Copper Proteins: l'azurina, sia nella forma nativa sia nella forma mancante del ponte disolfuro, Cys3Ala/Cys26Ala, ottenuta tramite mutagenesi sito-specifica, e l'amicianina. Usando metodi di simulazione al computer, le caratteristiche spettrali di queste proteine sono state descritte in termini di distribuzioni gaussiane dei principali parametri dell'Hamiltoniana di spin: i tensori g ed A. I risultati mostrano che la velocità di congelamento e la composizione del solvente influiscono sull'eterogeneità strutturale delle due proteine, quantificata dalle deviazioni standard di g ed A. In particolare, entrambi questi parametri si riducono dopo un ciclo di slow cooling; una tale riduzione è più significativa quando si aggiunge del glicerolo alle soluzioni proteiche. Il confronto tra le proteine al rame investigate mette in luce che la riduzione delle due deviazioni standard è più pronunciata nelle azurine rispetto all'amicianina e che il mutante dell'azurina, Cys3Ala/Cys26Ala ha un'eterogeneità strutturale più bassa di quella mostrata dalla proteina nativa. La notevole somiglianza nella sfera di coordinazione del rame delle proteine suggerisce una struttura più rigida della matrice proteica dell'azurina in assenza del ponte disolfuro confrontata con l'azurina nativa e dell'amicianina rispetto ad entrambe le forme di azurina.
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